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抗體作為細胞生物學和生物化學中最重要的試劑之一，科學界每年在這類試劑上的花費約達20億美元^[1]。但是我們經(jīng)常會聽到一些令人沮喪的結果---抗體不起作用，實驗結果無法重復。

抗體的不可靠性給生物學研究（包括癌癥，代謝，免疫學等）帶來巨大的損失，尤其是流式實驗過程，抗體的選擇極其重要，可重復性差，特異性不足，批間差異性等均可導致錯誤結果和大量時間的浪費。但近年來，生物界對實驗的可重復性越來越關注，傳統(tǒng)抗體存在的問題凸顯出來：

• 每使用一管新抗體都需要進行滴定測試，做不好還浪費抗體；

• 那么多種同型對照，是人是鼠傻傻分不清楚；

• 步驟復雜，一旦忘記加 Fc 阻斷試劑，一切從頭來過；

• 抗體不佳，陽性細胞群不明顯，但樣品珍貴，實驗就地擱置；

• ……

2015年2月份，瑞士蘇黎世大學（University of Zurich）蛋白質工程學家Andrew Bradbury，Andreas Plückthun和來自世界各地的110名研究人員在Nature上共同倡議：抗體的生產(chǎn)應該標準化^[2]。像基因一樣，抗體也應由它們的序列來定義，并且應該在細胞系中重組而成，而非通過動物免疫得到，這樣才能保證抗體的標準化及實驗的可重復性。有科學家提出：使用重組抗體^[1]。


重組抗體不同于傳統(tǒng)抗體，無需通過動物源性的樣本制備，由改造后的抗體基因序列直接在哺乳動物細胞中表達，細胞培養(yǎng)均在標準化，無血清的環(huán)境中進行?？贵w的生產(chǎn)均在遺傳背景完全相同的細胞系中表達，極大避免了表達系統(tǒng)不同而帶來的抗體批次間質量差異性。

美天旎 REAfinity^TM 重組抗體——為流式而生

什么是 REAfinity 抗體？
REAfinity 抗體是一種重組基因工程改造抗體，是將傳統(tǒng)的小鼠或大鼠雜交瘤來源的單克隆抗體的抗原結合區(qū)（Fab）與經(jīng)過突變的人 IgG1 的恒定區(qū)（Fc）進行基因重組而成。

為什么說 REAfinity抗體是為流式而生？

• 1）批次間穩(wěn)定一致

REAfinity重組抗體源于一段只編碼一種重鏈和輕鏈的DNA序列，從而確?？贵w的超高純度。標準化的培養(yǎng)條件下，由哺乳動物細胞表達，保證了抗體質量的批次間穩(wěn)定性。
 

圖2：對抗體進行質譜分析，數(shù)據(jù)表明：REAfinity抗體純度非常高，而雜交瘤來源的抗體是一種混合物。(A)對兩個雜交瘤來源的單克隆抗體樣本進行質譜分析，可以看出，它們都含有一條分子量接近23,635Da的污染輕鏈。(B)兩個REAfinity抗體樣本的質譜分析結果顯示，其含有極高純度的輕鏈。
 

• 2）通用型同型對照

所有的REAfinity抗體都是人IgG1亞型；因此，對于超過1萬種REA克隆號的所有抗體來說，只需一種人IgG1同型對照。根據(jù)抗原表達位置不同，該通用型同型對照抗體分為膜表面型和胞內型兩類，無需花費時間尋找合適的同型對照抗體。
 

圖3：使用REAfinity抗體時，只需一種通用型同型對照，降低了實驗設計的復雜程度

• 3）無需Fc受體阻斷

REAfinity抗體Fc段經(jīng)基因突變改造，從而消除了抗體與Fcγ受體的非特異性結合。因此，在流式分析中，無需額外增加阻斷步驟。
 

• 4）優(yōu)選序列，染色指數(shù)高

挑選最佳克隆號的抗體，以該抗體序列作為改造的基礎，所以REAfinity抗體親和力更高、特異性更好；REAfinity抗體本身背景值低、抗體與熒光素結合的優(yōu)良工藝，二者保證了抗體的高染色指數(shù)。

參考文獻：
[1]Goodman SL. The antibody horror show: an introductory guide for the perplexed. N Biotechnol. 2018 Oct 25;45:9-13. doi: 10.1016/j.nbt.2018.01.006. Epub 2018 Feb 3. PMID: 29355666.
[2]Bradbury, A., Plückthun, A. Reproducibility: Standardize antibodies used in research. Nature 518, 27–29 (2015). https://doi.org/10.1038/518027a.